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窖泥中己酸菌处理条件的优化
2019-05-30 16:22:23   来历:《明升备用网址》   作者:汪慧慧 杜祥宝 李庆腾 秦方园 李顺涛 习小红 高硕 孙小雨   

摘 要:以优质五粮发酵池的窖泥为基材,对其进行热选条件的优化,别离纯化后得到的己酸菌制成己酸菌液。调查其产气才能、成长周期、活菌数量,用以得到最优化的热处理条件。

实验中五粮发酵池的窖泥菌液,在90℃恒温处理5min,冷却后接入己酸菌培育液中培育,得到的己酸菌更优质。

关键词:窖泥,己酸菌,热处理,别离纯化

汪慧慧 杜祥宝 李庆腾 秦方园 李顺涛 习小红 高硕 孙小雨

(山东百脉泉酒业股份有限公司)

1 导言

在我国明升m88.com中,浓香型明升m88.com有无足轻重的位置,其酒质和产值,又离不开生产中菌种质量及数量的多少。己酸菌是浓香型明升m88.com酿制中产己酸乙酯主体香成分的功用菌。它归于厌氧棱状芽孢杆菌,其孢子具有耐热性。近年来,百脉泉酒业技能中心将优质五粮老窖窖泥为基材,对窖泥进行热处理条件的优化,以得到愈加优秀的己酸菌菌种。该菌种产气旺盛、菌种强健,广泛使用于浓香型大曲酒的窖池保养、人工窖泥培育等。

2 实验部分

2.1 仪器与试剂

样品:双轮底发酵池的窖泥,五粮发酵池的窖泥,三粮发酵池的窖泥。

培育基:无水乙酸钠5g/L(AR),酵母膏5g/L(AR),硫酸铵4g/L(AR),磷酸氢二钾0.2g/L(AR),硫酸镁0.2g/L(AR),碳酸钙5g/L(CP),硫酸铜指示剂。

器件:立式压力蒸汽灭菌锅,生化培育箱,N-120(A)型生物显微镜,无菌操作台,实验室超纯水器,抽气针筒,移液管。

2.2实验进程

1.用无菌水装备3000ml的己酸菌培育基,封口后,121℃灭菌30分钟。一起灭菌待用的250ml三角瓶,移液管。待培育基降温至32℃~34℃时,放入无菌操作台或无菌接种室紫外线灭菌20分钟,分装至250ml三角瓶备用。

2.取天然发酵池的老窖泥10g,用无菌水定容至100ml,充沛混匀。热处理条件进行处理。

3.将热处理后的窖泥参加250ml三角瓶中,接种量为10%,充沛混匀。最终每瓶各加乙醇含量为2%~3%,封口后放置33℃的生化培育箱中培育调查。

3成果与评论

3.1窖泥的挑选

取百脉泉酒业的双轮底发酵池的窖泥,五粮发酵池的窖泥,三粮发酵池的窖泥各10g,加无菌水定容至100ml ,摇匀。取原菌液1ml,加9ml的无菌水混匀,顺次稀释,得稀释度10-1、10-2、10-3、10-4。用血球计数板显微镜计数,计数时留意稀释度是否适宜,不能太浓或太稀,计数得每克窖泥所含的总菌数。

实验测得1g双轮底发酵池的窖泥总菌数为3.8×1010个,1g五粮发酵池的窖泥5.1×1010个,1g三粮发酵池的窖泥2.6×1010个,其间五粮发酵池的窖泥总菌数含量最高,依据窖泥中微生物的品种和数量均定着窖泥的质量,本实验选取五粮发酵池的窖泥为基材,展开己酸菌的热处理条件优化的研讨。

3.2窖泥培育液的热处理条件优化

3.2.1热处理温度的挑选

取五粮发酵池窖泥,制备菌液,经热处理后接种到液体培育基中,放置33℃的生化培育箱中培育调查。

由表1能够看出,当水浴时刻均处理10分钟时,因为不同己酸菌孢子及其他菌类的耐热程度有必定的差异,跟着温度的升高,总菌数出现下降的趋势,但跟着温度的上升,成长周期延伸,菌种被钝化。

依据生物显微镜调查,不难发现,跟着温度的升高,杂菌数量削减,90℃处理培育后未见杂菌。如表1。

3.2.2热处理时刻的挑选

因为菌液经条件为90℃10min处理后活菌数尽管削减,但依据生物显微镜调查无杂菌,处理后发酵最能到达别离纯化的意图。即本公司选定90℃为热处理温度,水浴时刻别离设置为3min,5min,7min,10min,经热处理后接种到液体培育基中,放置33℃的生化培育箱中培育调查。

实验标明,当温度为90℃时,跟着处理时刻的延伸,总菌数削减,且成长周期增加。热处理5min与3min比较而言,总菌数量不同不大,但热处理3min后的培育液,镜检调查有少数杂菌,故本公司选定热处理优化条件为90℃5min。如表2。

3.3己酸菌菌液的功能测验

3.3.1己酸菌产气调查

经热处理后的培育液,成长周期为5天,实验中的成长周期为液体培育基中见显着气泡发生。延伸培育时刻,以热处理后的液体培育基为母液,接种到第三代时成长周期缩短为4d,产气旺盛,阐明热处理使己酸菌纯化,且因遭到训练而增强了生机。

3.3.2已酸菌镜检及产酸判定

延伸发酵培育时刻到13d,先把待测菌液稀释到适宜浓度,用生物显微镜调查只见杆菌和芽孢未见其他杂菌且成长活泼,直接计数可达6.3亿个/m l。

取待测菌液3ml放入比色管内,再参加2%硫酸铜溶液1ml最终参加乙醚2m l,盖好摇匀,静置3分钟,管内分层,上层可见绿色且色彩较深,阐明己酸菌成长杰出且有己酸发生。

4定论

扩展培育时己酸菌菌种的选取至关重要,本公司对窖泥的热处理优化条件进行了严厉检测,热处理温度、时刻这两个要素相互影响,在单要素实验成果的基础上,结合本公司对己酸菌培育基扩展培育的纯度要求,优化热处理条件后得到最佳热处理条件为:90℃,5min。

制备的己酸菌菌液菌种强健活泼、产气旺盛,在扩展培育时要留意厌氧培育,无菌接种操作进程。

制备的培育液广泛使用于浓香型明升m88.com的灌窖、窖池保养以及人工窖泥的培育,以期改进和进步浓香型明升m88.com的质量。
 


 

修改:王丹

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